Rozwiązywanie Problemów Z żelami Do Elektroforezy DNA

Ostatnio kilku użytkowników podzieliło się z nami, że napotkali pewne problemy z żelami do elektroforezy DNA.

Czy Twój komputer działa wolno i wolno? Czy nękają go tajemnicze komunikaty o błędach i awarie? Jeśli tak, to potrzebujesz Reimage — najlepszego oprogramowania do naprawy błędów systemu Windows i przywracania optymalnej wydajności.

Brak wstążek podczas mroźnego przodu.Próbka podłączona do typu studni nie opada na całe dno.Próbka wychodzi z każdej naszej studni.Wstążki są rozłożone pionowo.Na pewno będzie za dużo grup.Żel spływa nietypowo wolno.Żel działa nienormalnie szybko.Białko jest zbyt blisko siebie (nie do końca rozwiązane)

Możliwe prowadzenie do Zalecenia Przygotowanie żelu Gęsty żel
  • Przygotowując poziome żele agarozowe, zachowaj grubość roztworu 3-4 mm. Żele o grubości powyżej 5 milimetrów mogą powodować rozpraszanie pasm na czas elektroforezy.
Słabo dojrzała
  • Dokładnie wyczyść grzebień żelowy przed nałożeniem żelu.
  • Aby zapobiec spływaniu modelu przez dno z powodu żelu i zabrudzeniu pasm testowych, nie dociskaj grzebienia do włosów do rzekomo poziomego dna połączonego żelem.
  • Należy unikać przepełniania pojemników żelem, ponieważ może to nieuchronnie doprowadzić do połączenia wszystkich dołków.
  • Przed zdjęciem grzebienia pozostaw wgłębienia zawsze wystarczające.
  • Jeśli żel zbyt często twardnieje, wyjmij grzebień ostrożnie i wygładź, aby uniknąć uszkodzenia rowków.
Niewłaściwy typ żelu
  • Do elektroforezy jednoniciowych nukleinowych kwasów tłuszczowych (np. RNA) należy przygotować żel denaturujący do wydajnego rozdziału. W wariacji unikaj stosowania żeli denaturujących wraz z dwuniciowymi próbkami DNA.
Przygotowanie próbki próbka przeciążona
  • Nie używaj więcej niż niewątpliwie nieuniknionej liczby próbek do wykonania elektroforezy; Zazwyczaj zaleca się od 0,1 do 0,2 µg w odniesieniu do próbki na milimetr żelu o odpowiedniej szerokości. Paski przeciągania zdeformowane przez paski w kształcie litery U, które pojawiają się w związku z łączeniem, są powszechne przy zakupie zbrylonych żeli.
Uszkodzona próbka
  • Upewnij się, że zebrane odczynniki mają jakość biologii molekularnej, ale materiał laboratoryjny jest wolny od nukleaz. Podczas obchodzenia się z kwasami nukleinowymi, zwłaszcza z kwasami nukleinowymi, należy postępować zgodnie z dobrym zachowaniem laboratoryjnym (np. nosić rękawice robocze, unikać problemów z nukleazą, pracować w pomieszczeniach, etykietach itp.).
Próbka o wysokim zasoleniu
  • Upewnij się, że grupa soli w buforze wstrząsowym jest zgodna z bardzo ograniczonym żelem; w razie potrzeby cienka etykieta do załadunku.
  • Jeśli procedura kwasu nukleinowego jest teraz na ekranie wysokiego zasolenia, przed dodaniem buforu ładującego podlej próbkę gorącą wodą z kranu niezawierającą nukleaz. W razie potrzeby oczyść lub wytrąć próbkę kwasu nukleinowego żołądka i ponownie zawiesz ją w wodzie wolnej od nukleaz, aby usunąć nadmiar soli.
Próbka wysokobiałkowa
  • Białko znajdujące się w naszej własnej próbce może zakłócać elastyczność próbki w żelach skórnych. Usuń białko przez oczyszczenie, a prawdopodobnie nawet próbkę, zdysocjuj zamiast denaturować białko, biorąc wybór do ładunku, absorbując kolory za pomocą SDS i podgrzewając przed ponownym zasileniem.
Niekompatybilne pobieranie buforów
  • W przypadku elektroforezy jednoniciowej kwasu nukleinowego należy użyć barwnika obciążającego zawierającego denaturant, a następnie upiec próbkę, aby uniknąć niepożądanych dupleksów.
  • W przypadku elektroforezy dwuniciowego DNA, ładującego barwnika, który ulega denaturacji, należy unikać podgrzewania naklejki, a ponadto nie podgrzewać jej w celu wytworzenia struktury dupleksu.
Gellauf Bąbelki podczas ładowania próbki
  • Upewnij się, że podczas ładowania próbki nie tworzą się kieszenie powietrzne, aby utrzymać odkształcenie paska.
Ładowarka uszkodzona
  • Unikaj przekłuwania próbki takimi specjalnymi końcówkami do pipet podczas ładowania naszej próbki.
Próbki biologiczne wody ze studni z pozostałościami związanymi z akryloamidem i/lub mocznikiem
  • Podczas przygotowywania żeli poliakryloamidowych należy odpowiednio usunąć pozostałości (i mocznik akryloamidowy w przypadku żeli denaturujących) w wyniku dołków po załadowaniu czeku.
Bardzo niskie, może doskonałe napięcie
  • Zastosuj tensenot zgodnie ze wskazówkami dotyczącymi zalecanego zakresu rozmiaru, którego użyto chemikalia kwasu nukleinowego i mój bufor roboczy. Bardzo niskie lub prawdopodobnie wysokie napięcia mogą z pewnością prowadzić do nieoptymalnej rozdzielczości podczas rozdzielania substancji nukleinowych.
Bardzo krótki i/lub nieskończony czas
  • Pozostaw żel na tyle długo, aby zapewnić prawidłowe wchłanianie pasm. Jednak bardzo długie czasy analizy mogą prowadzić do nadmiernego nagrzewania, denaturacji próbek z dyfuzją pierścieni.
Niezgodny bufor wykonania
  • Upewnij się, że specjalny żel jest odpowiedni do przygotowania i bieżni, ale także jest odpowiednio przygotowany.
  • Użyj dokładnie prawidłowego wysokobuforowanego buforu do elektroforezy w ciągu 2 godzin.
Przykładowe renderowanie Przesyłanie strumieniowe na taśmę
  • Unikaj przechowywania żelu lub tego ogromnego opóźnienia w zakończeniu pomiędzy sprzężoną elektroforezą a obrazowaniem żelu. Pasma bardziej zwartych cząsteczek mogą ulec dyfuzji w zależności od barwienia kwasu nukleinowego zintegrowanego w żelu.
Ruchome pasy
  • Użyj frakcji żelu, napięcia i tranzytu, aby oddzielić biżuterię o tej samej wielkości cząsteczek. Wędrujące zespoły często wyglądają jak rozproszony, gruby, błyszczący kwartet.
Niewyraźna kamera do gry
  • Czytając żel przez obiektyw, zrób tak, kamera jest ustawiona bezpośrednio, aby zobaczyć go na ekranie.

Rozwiązywanie problemów z żelami do elektroforezy genetycznej

Nie możesz się pomylić z tym narzędziem do naprawy systemu Windows. Jeśli masz problemy, po prostu kliknij, a Twoje problemy zostaną rozwiązane.

Troubleshooting Dna Electrophoresis Gels
Risoluzione Dei Problemi Relativi Ai Gel Per Elettroforesi Del DNA
Solução De Problemas De Géis De Eletroforese De DNA
Устранение проблем с гелями для электрофореза ДНК
Dépannage Des Gels D’électrophorèse D’ADN
Felsökning Av DNA Electrophoresis Gels
Fehlerbehebung Bei DNA-Elektrophoresegelen
Problemen Met DNA-elektroforesegels Oplossen
Solución De Problemas De Geles De Electroforesis De ADN
Dna 전기영동 젤 문제 해결