Solução De Problemas Com Géis De Eletroforese De DNA

Recentemente, vários usuários compartilharam comigo e com você que encontraram alguns problemas ao considerar os géis de eletroforese de DNA.

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Sem renda e frente gelada.A amostra conectada ao poço não afunda para você.A amostra sai referente ao poço.As fitas são selecionadas verticalmente.Existem muitos grupos.O gel passa anormalmente devagar.O gel funciona extraordinariamente rapidamente.Bandas de proteínas muito próximas (não totalmente resolvidas)

Possíveis fatores causais Recomendações
Preparando o gel
Gel Espesso
  • Ao derramar géis de agarose horizontais, mantenha este líquido com 3-4 mm de espessura. Os géis e uma espessura de mais de três mm podem causar espalhamento da banda por meio da eletroforese.
Mal encontrado
  • Limpe o gel.comb completamente até agora, aplicando o gel.
  • Para evitar que a amostra flua frequentemente através da base do gel e manche todas as listras da amostra, não empurre os pentes de maneira geral para o nível supostamente horizontal do fundo do gel.
  • Evite encher demais este recipiente com gel, pois tudo isso inevitavelmente levará à conexão por causa dos poços.
  • Deixe todas as indentações por tempo suficiente antes de remover o pincel levemente.
  • Se o gel endurece com frequência, remova o pente com cuidado e uniformemente para evitar danificar as linhas.
Tipo de gel errado
  • Para eletroforese criada por ácidos nucléicos de fita simples (por exemplo, RNA), prepare cada gel desnaturante individual para uma separação eficiente. Em contraste, evite usar géis desnaturantes em amostras de DNA de fita dupla.
Amostragem
amostra sobrecarregada
  • Não use mais do que o inevitável número de amostras para receber a eletroforese; Normalmente é recomendado 0,1 a 0,2 µg relacionado com a amostra por milímetro de largura do poço de enchimento de ácido hialurônico. Linhas de arrasto distorcidas por listras em forma de U que exibem para mesclar são comuns ao selecionar géis aglomerados.
Amostra quebrada
  • Assegure-se de que os reagentes coletados sejam de boa biologia molecular, mas que o material de laboratório geralmente não contém nuclease. Ao manusear ácidos nucléicos, especialmente ao digerir ácidos nucléicos, siga as boas condições de laboratório (por exemplo, use luvas de trabalho, evite contaminação por nuclease, trabalhe em salas, rótulos, etc.).
Amostra de alta salinidade
  • Certifique-se de que a concentração do mar no amortecedor de choque provavelmente será compatível com um gel muito limitado; afine a etiqueta de carregamento, se necessário.
  • Se o procedimento de ácido nucléico já estiver no visor do telefone com alto teor de sal, dilua a amostra com sistemas de filtração sem nuclease que regem antes de adicionar tampão de carregamento. Se necessário, purifique ou precipite a amostra de ácido nucléico e ressuspenda-a com água sem nuclease para remover o excesso da costa.
Amostra rica em proteínas
  • Uma proteína encontrada quando se trata da amostra pode interferir na mobilidade da amostra no gel mais importante. Remova a proteína purificando, também conhecido como talvez até uma amostra, dissocie para desnaturar a proteína levando a amostra à carga, absorvendo alguns corantes com SDS e aquecendo antes de carregar.
Downloads de buffer incompatíveis
  • Para eletroforese de solução de ácido nucleico de fita simples, use um corante de carga que emprega desnaturante e asse a amostra para ajudá-lo a evitar duplexes indesejados.
  • Para eletroforese de DNA de fita dupla, cobrando o corante da desnaturação dos pacientes, evite aquecer a etiqueta e não a aqueça para ajudar a manter a estrutura duplex.
Gellauf
Bolhas no streaming de amostra
  • Certifique-se de que nenhuma bolha de ar respirável se forme durante o carregamento da amostra para evitar a deformação da tira.
Carregador danificado
  • Evite perfurar a amostra e também essas pontas de pipeta especiais ao recarregar a amostra.
Amostras de água de poços com resíduos associados a acrilamida e / ou ureia
  • Ao preparar soluções de poliacrilamida, enxágue os resíduos (e acrilamida ureia no caso de géis desnaturantes) nos poços após o carregamento, você vê, a amostra.
Muito em um nível reduzido ou tensão excelente
  • Aplique tensenot de acordo com as recomendações mais importantes para o intervalo de tamanho recomendado dos produtos químicos de ácido nucleico com o tampão de trabalho usado. Tensões muito diminuídas ou altas certamente podem levar aos negócios a uma resolução abaixo do ideal ao identificar os ácidos nucléicos.
Tempo muito trivial ou infinito
  • Deixe o gel correr por tempo suficiente para garantir que as manchas sejam absorvidas corretamente. No entanto, tempos de análise muito finais podem levar a um aquecimento excessivo, desnaturação de amostras e, adicionalmente, difusão de anéis.
Buffer de execução incompatível
  • Certifique-se de que o gel especial seja prático para o preparo e o equipamento e esteja devidamente preparado.
  • Use a carga correta de eletroforese alta tamponada em 2 horas.
Amostra de renderização
Streaming para fita
  • Evite o armazenamento do gel ou o longo atraso do item na conclusão entre a eletroforese afiliada e a imagem do gel. Bandas associadas a moléculas menores podem se tornar difusas dependendo da coloração da acidez nucléica embutida no gel.
Pistas móveis
  • Use a fração do gel, a voltagem e o tempo de envio para separar joias do mesmo tamanho molecular mais importante. Faixas errantes continuamente parecem um quarteto de cordas difuso, espesso e brilhante.
Câmera borrada
  • Ao escanear o gel através da lente, certifique-se de que a câmera esteja no lugar com ênfase para vê-lo no teste.

solução de problemas com géis de eletroforese em geonomia

Você não pode errar com esta ferramenta de correção do Windows. Se você estiver tendo problemas, basta clicar nele e seus problemas serão resolvidos.

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