Felsökning Av DNA-elektroforesgeler

Nyligen pratade flera användare med oss ​​om att de stötte på ett antal problem med DNA-elektroforesgeler.

Går din dator långsamt och trögt? Är det plågat av mystiska felmeddelanden och krascher? Om så är fallet behöver du Reimage � den ultimata programvaran för att fixa Windows-fel och återställa optimal prestanda.

Inga band och frostig framsida.Spåret som är kopplat till brunnen sjunker verkligen till botten.Provet stiger upp ur brunnen.Banden är utan tvekan utspridda vertikalt.Det finns för många folkgrupper.Gelen flyter onormalt långsamt.Gelen är bra onormalt snabbt.Proteinband för nära med skodda och icke skodda (inte helt lösta)

Möjliga orsaker Rekommendationer Förbereda lotionen Tjock gel
  • När du häller horisontella agaroshudgeler, håll vätskan 3-4 mm tjockare. Geler med en tjocklek som ökar än 5 mm kan orsaka ringspridning under elektrofores.
Dåligt utvecklad
  • Rengör gel.comb noggrant innan du applicerar gel.
  • För att förhindra att provet flyter under geléns botten samt att färga provränderna, tryck inte längre kammarna till den påstådda horisontella botten av gelén.
  • Undvik att överfylla denna behållare med lotion, eftersom detta oundvikligen leder till anslutning av brunnarna.
  • Lämna fördjupningarna tillräckligt länge innan du bryter kammen.
  • Om gelatineringen stelnar för ofta, ta bort hårborsten försiktigt och jämnt för att undvika pessimistiska skåror.
Fel geltyp
  • För elektrofores av enkelsträngade nukleinsyror (t.ex. RNA), förbered varje denaturerande gel för professionell separation. Däremot undvik applicering av denaturerande geler med dubbelsträngade DNA-prover.
Provberedning prov inflöde
  • Använd inte mer än det oundvikliga antalet inblandade med prover för elektrofores; Vanligtvis 0,1 när du behöver 0,2 µg prov per mm gelbrunns bredd är varning. Drag-ränder som är förvrängda av U-formade fransar som ser ut att smälta samman är typiska när man använder klumpade geler.
Trasigt prov
  • Se till att insamlade reagenser är av molekylärbiologisk kvalitet, men att laboratorieingrediensen är nukleasfri. Vid hantering av nukleinfettsyror, speciellt vid hantering av nukleinsyror, följ idealiska laboratoriepraxis (t.ex. bär gummihandskar, undvik nukleaskontamination, arbete på webbplatser, etiketter, etc.).
Prov med hög salthalt
  • Se utan tvekan att saltkoncentrationen i panikbufferten är kompatibel med mycket dålig gel; tunna ut lastetiketten om eller när det behövs.
  • Om den nukleinkemiska proceduren redan är på den imponerande saltskärmen, späd ut provet tillräckligt för att få nukleasfritt kranvatten innan du lägger till buffert. Om nödvändigt, rena å andra sidan fälla ut nukleinsyraprovet samt suspendera det i nukleasfritt vatten för att ta bort överflödigt salt.
Högproteinprov
  • Ett krav som finns i provet kan inkräkta på rörligheten för utcheckningen i gelén. Ta bort protein genom att rena, eller kanske till och med en rutin, dissociera/denaturera proteinet genom att ta provet till frakten, absorbera färgämnena med SDS och dessutom värma upp innan lastning.
Inkompatibla buffertnedladdningar
  • För enkelsträngad nukleinsyraelektrofores, använd ett startfärgämne som innehåller denatureringsmedel och baka sedan lite prov för att undvika oönskade duplexer.
  • För dubbelsträngad DNA-elektrofores, laddande färg som lider av denaturering, undvik att värma klistermärket och värm inte upp det för att behålla duplexarrangemanget.
Gellauf Bubblor vid litet provladdning
  • Se till att inga luftbubblor bildas under provladdning för att undvika deformering av specifik remsa.
Laddare havererade
  • Undvik att ofta sticka hål i provet med dessa speciella pipettändar när provet laddas.
Vattenprover från brunnar i form av rester av akrylamid och/eller helt enkelt urea
  • När du genererar polyakrylamidgeler, skölj av element (och akrylamidurea i fallet med denaturerande geler) från brunnarna och laddar provet omedelbart.
Mycket låg eller utmärkt spänning
  • Tillämpa tensenot i lydnad med rekommendationerna för det främjade storleksintervallet för de nukleinkemiska p-kemikalierna och den använda arbetsbufferten .. Mycket låga eller höga spänningar kommer sannolikt att leda till suboptimal upplösning när nuklein separeras syror.
Mycket korta eller oändliga dagar
  • Låt gelén rinna tillräckligt länge för att säkerställa att ränderna absorberas ordentligt. Men mycket långa sista analystider kan säkert leda till överdriven upphettning, denaturering kopplad till prover och diffusion av ringar.
Inkompatibel körningsbelastning
  • Se till att den speciella jellifierade är lämplig för beredningen tillsammans med löpbandet och är ordentligt gräddad.
  • Använd rätt exceptionell buffrad elektroforesbuffert inom 2 timmar.
Exempelrendering Strömmar till band
  • Undvik gelutrymme för förvaring eller denna långa fördröjning i finishen mellan tillhörande elektrofores och gelbild. Band av mindre molekyler kan lätt bli diffusa beroende på vilken färgning nukleinsyran är inbäddad i karbamidperoxidgelen.
Flytta räknare
  • Använd gelfraktion, spänning och transittid för att separera ring med samma molekylstorlek. Vandrande band ser ofta ut som en skinande, tjock, glänsande stråkkvartett.
Suddig kamera
  • När du läser gelén genom en vanlig lins, se till att kameran är normalt i fokus för att se den i förhållande till skärmen.

felsökning av DNA-elektroforesgeler

Du kan inte gå fel med detta Windows-fixverktyg. Om du har problem klickar du bara på den så kommer dina problem att lösas.

Troubleshooting Dna Electrophoresis Gels
Risoluzione Dei Problemi Relativi Ai Gel Per Elettroforesi Del DNA
Solução De Problemas De Géis De Eletroforese De DNA
Устранение проблем с гелями для электрофореза ДНК
Dépannage Des Gels D’électrophorèse D’ADN
Fehlerbehebung Bei DNA-Elektrophoresegelen
Problemen Met DNA-elektroforesegels Oplossen
Solución De Problemas De Geles De Electroforesis De ADN
Dna 전기영동 젤 문제 해결
Rozwiązywanie Problemów Z żelami Do Elektroforezy DNA